Zajímavosti
Objevte tajemství dlouhodobého uchování buněk.
Udržování vitálních buněčných kultur je poměrně náročný a komplikovaný úkol, zejména kvůli riziku jejich ztráty v důsledku kontaminace. Mimo jiné nejsou buněčné kultury stálé a podléhají různým změnám způsobeným stárnutím nebo enzymatickou a chemickou aktivitou. Tato rizika se snižují použitím kryogenního uchování – tzv. kryokonzervací.
Kryokonzervace je proces dlouhodobého uchování biologického materiálu v parách tekutého dusíku při -196 °C. Jedná se o klíčovou metodu v biologii a medicíně, která umožňuje uchování buněk, tkání, léčbu neplodnosti prostřednictvím uchování spermií a vajíček, uchování kmenových buněk pro regenerační medicínu a mnoho dalších aplikací.
Největším úskalím této metody je tvorba ledových krystalů uvnitř buněk, což vede k dehydrataci jak membránových systémů, tak i ostatních buněčných struktur. Negativní vliv intracelulární vody a ledu se proto omezuje přidáním kryoprotektiv (např. glycerol, DMSO) do kryokonzervačního média. Kryoprotektiva pronikají do buňky, nahrazují vodu a místo krystalizace roztok vitrifikuje, a tak chrání buňky před škodlivými účinky tvorby intracelulárních ledových krystalů.
Pro dosažení vitrifikace je třeba pracovat s velmi malým objemem vzorku a provést jeho šetrné ochlazení. Vzorek je postupně ochlazován, obvykle pomocí zamrazovacích kontejnerů, ve kterých dochází ke kontrolovanému snižování teploty, což také minimalizuje tvorbu ledových krystalů. Typická rychlost ochlazování je 1 až 3 °C za minutu. Po tomto zchlazení jsou vzorky co nejrychleji vloženy do nádoby s tekutým dusíkem, kde mohou být uchovány po dobu několika let.
Kryokonzervační médium s přídavkem kryoprotektiva sice minimalizuje krystalizační procesy v buňce, avšak může mít velmi nežádoucí toxické účinky. Hlavním cílem vitrifikačních metod je proto vyvážit maximální rychlost zamrazování a minimalizovat koncentraci kryoprotektiva. Mějte však na paměti, že různé buněčné typy mohou vyžadovat odlišné podmínky kryokonzervace, a to může komplikovat stanovení univerzálních protokolů.
Pro usnadnění práce můžeme doporučit kryokonzervační médium Bambanker umožňující zamrazování buněk při teplotě -80 °C nebo v tekutém dusíku. Bambanker je dodáván ready-to-use a jeho použití tak nemůže být jednodušší. S tímto speciálním médiem nám odpadá nutnost použití zamrazovacích boxů, které regulovaně snižujících teplotu. Buněčné linie zamrazené pomocí kryomédia Bambankeru lze skladovat po dobu několika let. Zároveň také poskytuje velmi dobrou regeneraci a viabilitu buněk po jejich rozmrazení. S použitím kryokonzervačního média Bambanker šetříte nejen svůj čas, ale i své buňky.
Autor: Mgr. Aneta Lásková, Produktový specialista - Life Science
